简述实时荧光定量PCR中荧光染料技术的原理和优缺点
荧光染料技术也称为DNA交联荧光染料技术。目前主要应用的染料分子是SYBR GREEN I, SYBR GREEN I是一种可以非特异地结合双链DNA小沟的荧光染料，它嵌合进 DNA双链，但不结合单链。在PCR反应体系中加入过量SYBRGREEN I染料，游离的过量 SYBR GREEN I染料几乎没有荧光信号，但当该染料能选择性地掺入至双链DNA分子中， 将会产生很强的荧光信号。在PCR扩增过程中，由于新合成的双链DNA不断增加，SYBR GREEN I染料结合到双链DNA分子中也增加，因此，PCR扩增的产物越多，SYBR GREEN I 则结合的越多，荧光信号就越强。 该技术的优点在于荧光染料的成本低，同时不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光 标记，适用于任何反应体系，操作亦比较简单，因此在科学研究中该技术应用得更为广泛。 然而由于SYBR GREEN I染料能与任何双链DNA结合，因此，它也会结合到非特异性扩增 产生的双链分子或引物二聚体中，使实验产生假阳性信号。非特异性扩增产生的双链分子 和引物二聚体所致的非特异的荧光信号目前可以通过恪解曲线(MELTING CURVE)来区分特异 性和非特异性扩增。另外，通过选择合适的引物和优化反应体系也有助于减少非特异的荧 光信号。总体来说，SYBR GREEN I是一种最基础的实验手段在许多方面已有应用。
